PEMERIKSAAN ANGKA LEMPENG TOTAL, ANGKA KAPANG/KHAMIR DAN IDENTIFIKASI BAKTERI PATOGEN

Pertumbuhan jasad renik pada media tertentu yang diinokulasi dan diinkubasi pada suhu yang sesuai menghasilkan suatu perubahan yang dapat diamati secara visual berupa kekeruhan, perubahan warna, terbentuknya gelembung gas dan pertumbuhan koloni.

 

B.   Media dan pereaksi

1. Buffer fosfat pH 7,2
2. Tryptic Soy Agar (TSA)
3. Tryptic Soy Broth (TSB)
4. Cetrimide Agar
5. MacConkey Agar
6. Triple Sugar Iron Agar
7. Lactose broth (LB)
8. Tetrathionate enrichment broth
9. Selenite cystein enrichment broth
10. Brilliant-green phenol-red lactose sucrose agar
11. Bismuth sulfite agar acc. Wilson Blair
12. Eosin methylen blue
13. Vogel-Johnson agar (base)
14. Staphylococcus selective agar (base)
15. Gliserol
16. Larutan briliant hijau 0,1%
17. Larutan kalium tellurite 1%
18. HCl 0,1 N
19. NaOH 0,1 N
20. Letheen Broth
21. Larutan TTC 0.5%

 

1. Alat
2. Tabung reaksi
3. Cawan petri
4. gelas ukur
5. Jarum Ose
6. Blue Tip steril
7. Syringe 10 mL
8. Pinset steril
9. Part Sterility (Filter holder, Manifold, Vacuum Pump, vacuum pump)
10. Sarung tangan
11. Bungkus Sterilisasi
12. Vortex
13. Transferpette
14. Baju White Steril

 

1. Prosedur pengambilan sampel
2. Pengambilan sampel disesuaikan dengan parameter dan spesifikasi pemeriksaan yang ada/sesuai protap.
3. Sampel harus dapat mewakili secara keseluruhan sampel yang ada. Dengan titik Atas, Tengah, dan Bawah, serta tempatkan sampel dalam wadah steril.

 

E.    Perlakuan sampel

1. Larutkan sampel dalam larutan buffer fosfat pH 7,2, vortex hingga homogen. (larutan A)
2. Jika sediaan uji adalah zat padat yang tidak larut sempurna, serbukkan hingga halus dan suspensikan dalam zat pensuspensi yang sesuai. Jika sediaan tidak dapat bercampur dengan air (misalnya cairan salep, krim, malam) suspensikan dalam zat pensuspensi yang cocok.

 

F.    Pemeriksaan Angka Lempeng Total dan Angka Kapang/Khamir

1. Cara Lempeng
   1. Pipet 1 ml Larutan A ke dalam masing-masing 3 cawan petri steril, segera tambahkan masing-masing 15-20 ml media TSA yang telah ditambahkan larutan TTC 0,5% dengan konsntrasi dalam TSA 1% untuk ALT dan 1 mL dalam masing-masing 3 cawan petri steril, segera tambahkan masing-masing 15-20 ml media PDA untuk AKK yang telah dicairkan dan dibiarkan pada suhu 45°C, campurkan dengan memutar-mutar cawan, biarkan membeku pada suhu kamar, setelah membeku, balikkan cawan dan inkubasi pada suhu 30-35°C selama 3 - 5 (ALT). Untuk AKK inkubasi pada suhu 20-25 ⁰C selama 5-7 hari tanpa membalikkan petri.
2. Hitung banyaknya koloni yang tumbuh pada media TSA dan media PDA setelah diinkubasi.

 

1. Identifikasi Escherichia coli dan Salmonella sp
   1. Pipet larutan A (sesuai Spek) dan masukkan kedalam media Lactose Broth (LB). (Vortex hingga homogen). Inkubasi hingga terdapat pertumbuhan (maksimum 2 hari) pada suhu 30-35 °C (Larutan B).
   2. Jika tidak ada pertumbuhan yang ditandai dengan media jernih, analisa dihentikan. Hasil dianggap negatif.
   3. Jika keruh, pipet 1 ml larutan B, masukkan ke dalam tabung yang berisi 10 ml media Selenite cystein enrichment broth. Inkubasi pada suhu 30-35°C selama 12 – 24 jam (Larutan C).
   4. Pipet 1 ml larutan B, masukkan ke dalam tabung yang berisi 10 ml media Tetrathionate enrichment broth. Inkubasi pada suhu 30-35°C selama 12 – 24 jam (Larutan D).
   5. Ambil 1 ose larutan B, goreskan pada media Mac Conkey Agar. Inkubasi pada suhu 30-35°C selama 24 jam (agar A).

Coliform positif : koloni berwarna merah ungu dengan lingkaran sinar gelap.

6. Ambil masing-masing 1 ose larutan C dan D, goreskan pada media Brilliant–green phenol-red lactose sucrose agar. Inkubasi pada suhu 30-35°C selama 24–48 jam (agar B). Salmonella sp positif : Koloni merah muda dengan lingkaran cahaya merah di dalamnya.
7. Ambil masing-masing 1 ose larutan C dan D, goreskan pada media Bismuth sulfite agar. Inkubasi pada suhu 30-35 °C selama 24 – 48 jam (agar C).

Salmonella typhosa positif : Koloni hitam pada bagian tengah, dengan dikelilingi warna logam mengkilap.

Salmonella sp positif : Koloni kecil, hitam, hijau atau terang.

8. Ambil masing-masing 1 ose agar B dan C, goreskan dan tusukkan pada media TSA, inkubasi pada suhu 30-35 °C selama 24 jam. Amati koloni yang tumbuh.

Salmonella sp. positif : Bila bekas tusukan kuning, kehitaman dan goresan berwarna merah.

9. Ambil 1 ose agar A, goreskan pada media Eosin methylene blue lactose agar. Inkubasi pada suhu 30-35 °C selama 24 – 48 jam. Amati koloni yang tumbuh.

E.Coli positif: Koloni biru ungu atau kehijauan, mengkilap seperti logam dalam pantulan cahaya, diameter 2-3 mm.